DualDur® тест за лаймска болест

Кои са LYME Diagnostics?

Lyme Diagnostics Ltd. са унгарска фирма, фокусирана върху по-точната рутинна диагностика на лаймската болест. Повече можете да прочетете на сайта им www.lymediagnostics.com или www.facebook.com/lymediagnostics

 Доктор Béla Pál Bózsik MD работи с помощта на класическа микроскопия в тъмно поле и осъзнава, че има нужда от методи за разграничаване на спирохетата от артефактите в препаратите. За тази цел той разработва реактив – DualDur. Кръвната проба на пациента трябва да бъде взета в тази течност. Този реактив прави останалите предмети твърди и неподвижни и няма изкуствени продукти, докато Борелиите са запазени и продължават да се движат нормално.

Реактивът и методът DualDur® са разработени въз основа на 30-годишен опит в изследване на спирохети и диагностика на Лаймска болест. Реактивът DualDur ще позволи на анализатора в лабораторията, анализиращ кръвни проби, да вижда само спирохетите, 1000 пъти концентрирани, живи и движещи се. Този факт е потвърден чрез имунофлуоресценция и PCR. Бяха проведени безброй изследвания с DualDur, като внимателно се наблюдават и записват клинични симптоми и се извършват 110 000 серологични теста за потвърждаване на диагнозата.

Предимства на теста DualDur®

Проблеми със съвременните диагностични методи за лаймска борелиоза:

• най-често използваният тест, серологичният, не е надежден, особено в ранния стадий на заболяването и след лечението;
• директните диагностични методи могат да се провалят поради ниския брой и бързото разлагане на борелия в пробата;
• култивирането и PCR имат нисък добив в проби, които могат лесно да бъдат получени (напр. кръв);

DualDur е среда за клетъчна технология и метод за подготовка, който:

• съхранява пробата от кръв или ликвор за 2-3 седмици, включително съдържащата се в нея борелия;
• концентрира Borrelia 1000 пъти;
• директно изследва концентрата;
• се основава на напълно различна концепция от другите методи;

Крехката природа на Борелия

Спирохетите са грамотрицателни, подвижни, спираловидни бактерии, с дължина от 3 до 500 микрона (1 m = 0,001 mm). Спирохетите са уникални с това, че имат вътреклетъчни камшичета  (аксиални фибрили или аксиални нишки).

Спирохетата Borrelia Burgdorferi s.l., в по-широк смисъл е отговорна за лаймската болест. Borrelia Burgdorferi е много чувствителен патоген. Неговата предпочитана температура на околната среда е 35 ° C и изисква специална хранителна среда, различна от тази, използвана за култивиране на други бактерии.

Без реагент DualDur, разпадането на борелия започва почти веднага в прясна кръв.

Недостатъците на най-често използваните диагностични тестове, серология:

Използването на серологията при лаймска борелиоза е много обсъждано. Двустепенният метод за изследване ELISA и Western-blot не успява поради ниска чувствителност в няколко случая, особено при:

• ранният стадий на заболяването (вж. справка);
• ниско ендемични области (вж. справка);
• така наречената сероотрицателна лаймска болест, когато имунната реакция отсъства или закъснява;
• фалшиво положителни случаи, когато пациентът е имунизиран, от кръстосана реакция от спирохети или вирусни инфекции;
• Лупус (SLE) или други автоимунни заболявания;

Следователно, серологията може да бъде отличен инструмент за увеличаване на специфичността за пациент с известна инфекция, но не и скрининг инструмент за ранен стадий.

Естеството на DualDur®

Само няколко часа след ухапването от кърлеж, Борелия може да попадне в кръвния поток на гостоприемника и да започне да се разпространява. Въпреки това, дори в късните и тежки случаи на лаймска борелиоза, борелията може да присъства в кръвта в относително нисък брой. Понякога само няколко бактерии могат да бъдат открити в цял мл. кръв.

За да се изследват само спирохетите, средата и методът DualDur отделят бактериалното съдържание с ниско тегло в кръвта и ги концентрират поне 1000 пъти. Това се прави по безопасен начин, така че бактериите да не бъдат увредени и да показват нормални признаци на живот, те дори се размножават.

Заключения от спецификацията на теста 

• Микроскопията DualDur® може да идентифицира инфекция с борелия с голяма сигурност (чувствителност 93%).
• Микроскопията DualDur може да разграничи видовете Borrelia от видовете Treponema визуално, с 88% специфичност.
• Комбинацията от метода DualDur с PCR директен анализ дава комбинирана чувствителност и специфичност от 100%.
• Методът DualDur може да постигне възможно най-ниското ниво на откриване чрез микроскоп (1 спирохета в 50 зрителни полета).
• Пълната спецификация на теста и информация за клиничните изпитвания можете да намерите във файла “Спецификации на тест DualDur“

Стабилност на пробите

Кръвните проби, съхранявани в DualDur, остават стабилни поне 172 часа при стайна температура, така че Borrelia могат да бъдат анализирани чрез PCR и микроскопия.

Възможно ли е да се пропусне наличието на спирохети в кръвта?

Въпрос към Lyme Diagnostics: Ако в кръвната проба няма спирохети на Borrelia, но въпреки това има спирохети в кръвта или тъканите на човека? Как е отчетена тази възможност?

Отговор: Този метод е много чувствителен, което идва от факта, че бактериите от 4 ml кръв се концентрират в една капка.

В ранните дни на откриването на болестта, някои изследователи решили, че няма достатъчно Borrelia в кръвта, за да бъдат открити. Факт е, че тези бактерии се различават по брой, те се размножават с нови поколения в цикли от 2-3 седмици. Цифрите стават много високи, толкова високи, че дори обикновен кръвен тест може да ги открие в определени моменти – по този начин причината за болестта е открита чрез микроскопия в тъмно поле.

Въпреки това, за да се намерят борелиите, когато броят им е най-малък, се изисква концентриране. В тези моменти изглежда сякаш те липсват в кръвта, но могат да бъдат открити чрез концентриране или култивиране.

Концентрацията на Borrelia в различни тъкани е измерена в няколко експеримента и досега редица публикации потвърждават факта, че този брой е далеч над нивото на откриване при изследването DualDur.

Ако в кръвта няма откриваемо количество бактерии, това означава, че пациентът е в излекувано състояние. В случай на настояща инфекция, нивото на бактериите се променя между няколко хиляди борелии на милион тъканни клетки, но понякога спадат и до няколкостотин. Но дори и най-ниското ниво все още е поне 100 пъти по-високо от нивото на откриване при методите за концентриране – комбинирано с микроскопия или PCR. В момента, DualDur е единственият клинично тестван и готов за лаборатория ин витро диагностичен метод (IVD), който работи на този принцип.

Зададохме нивата на изпитване чрез разделяне на неуспешни резултати от теста, положителни, отрицателни тестове и стойностите между двете. Десетки хиляди тестове потвърдиха, че положителните резултати съответстват на клиничните симптоми.

Така че, ако има Borrelia в тялото на някого, в количества, които причиняват симптоми, то е много вероятно да бъде открито от теста. Тези бактерии използват кръвта за разпространение в тялото по всяко време и дори в случай на силна имунна реакция може да бъде засечена борелията, атакувана от антитела.